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荧光定量PCR仪如何实现对PCR产物的实时监测?

更新日期:2024-03-07      点击次数:137
  荧光定量PCR仪是一种用于实时监测PCR扩增过程中产物的仪器。其原理基于荧光染料或探针与目标DNA序列结合后产生的荧光信号,通过实时检测荧光强度的变化,可以实现对PCR产物的实时监测和定量分析。
 
  荧光定量PCR仪的主要组成部分包括光学系统、温度控制系统、样品处理系统和数据处理系统。以下是其实现对PCR产物实时监测的过程:
 
  1、荧光染料或探针的选择:荧光定量PCR实验中,需要选择合适的荧光染料或探针与目标DNA序列特异性结合。常用的荧光染料有SYBRGreenI和SYBRGold,它们能非特异性地结合到双链DNA上,发出荧光信号。而探针类荧光标记物如TaqMan探针、MolecularBeacon等,则是通过特异性地结合到目标DNA序列上,发出荧光信号。
 
  2、样品制备:将待测样本、引物、荧光染料或探针、PCR反应液等混合在一起,加入到PCR管中。然后将PCR管放入荧光定量PCR仪的样品槽中。
 

荧光定量PCR仪

 

  3、PCR循环过程:温度控制系统会按照预设的程序,对样品进行升温、降温,实现PCR循环过程中的变性、退火和延伸阶段。在每个循环的退火和延伸阶段,光学系统会激发荧光染料或探针产生荧光信号,并通过检测器实时检测荧光强度。
 
  4、数据处理与分析:数据处理系统会实时记录每个循环中荧光信号的变化,并将其转化为扩增曲线。通过对扩增曲线进行分析,可以得到目标DNA序列的起始拷贝数、扩增效率等信息,从而实现对PCR产物的定量分析。
 
  5、结果输出:通常会将实验结果以表格、图形等形式展示出来,方便实验者进行后续分析和判断。
 
  总之,荧光定量PCR仪通过荧光染料或探针与目标DNA序列结合产生的荧光信号,实现了对PCR产物的实时监测和定量分析。这使得荧光定量PCR技术在基因表达分析、病原体检测、遗传变异分析等领域得到了广泛应用。
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